EVO视讯为您提供的RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养指南，旨在帮助研究人员有效培养和处理这一细胞系。以下是详细的细胞培养条件、操作步骤及注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基 + 10% 胎牛血清 + 1% 双抗
传代方法：建议首次传代比例为1:2。
备注：在使用无菌离心管收集培养基后，可作为过渡对比培养。如果对比培养效果不理想，推荐直接购买EVO视讯的完整培养基。

二、细胞收到后的处理

将细胞培养至良好状态后，添加完整培养液并封闭瓶口，可以有效保证细胞在运输过程中的存活。在收到细胞后，用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便细胞状态稳定。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存（建议40x, 100x, 200x三个倍数各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度不足80%，请将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基培养。如果细胞密度已超过80%，可按照以下步骤进行传代：
1. 丢弃培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA），置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞状态，如果细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲瓶子并加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2比例进行分瓶传代，补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，丢弃培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变圆后添加5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落。
3. 将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃上清，沉淀加入1ml EVO视讯无血清冻存液（货号：C7001），混匀后置入冻存管。
4. 冻存细胞应直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，必须在-80℃冰箱中存放超过24小时后再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护设备），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无冰晶，外壁用75%酒精擦拭；
2. 移取冻存管中的细胞至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这种现象是正常的。如遇此情况，建议将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清进行对比培养。再添加1-2ml胰酶进行轻柔操作，以确保细胞的完整性和活性。接下来按照上述步骤进行培养。

五、售后条款

EVO视讯对细胞售后问题的处理政策如下：
1. 细胞运输过程中出现的问题，如细胞丢失、瓶体破损等，符合条件可重发；
2. 接收到细胞后2天内未告知我们其存在问题，则视为产品合格；
3. 对于细胞活性及污染问题，需在指定时间内提供相关检测结果及照片；
4. 如果问题是由客户操作不当或不当培养体系引起，我方不予重发。

我们始终致力于提供高质量的细胞培养产品和优质的服务，欢迎您随时联系EVO视讯。