## 赭曲霉毒素检测试剂盒使用说明书（酶联免疫法）

### 1. 原理及用途

赭曲霉毒素是一种由曲霉菌属和青霉菌属的特定菌种产生的次级代谢物。其中，赭曲霉毒素A在自然界中分布最为广泛，且其毒性强烈，对人类及动植物的影响显著。本试剂盒采用间接竞争ELISA方法用于检测米面、花生、大豆等谷物及饲料样本中的赭曲霉毒素（Ochratoxins A, OTA）。试剂盒包括预包被偶联抗原的酶标板、辣根过氧化物酶标签、抗体、标准品及其他必要试剂。在检测过程中，加入标准品或样品溶液，样本中的赭曲霉毒素与酶标板上的预包被抗原竞争结合抗体，随后加入酶标记物，用TMB底物显色，样本的吸光度值与其所含赭曲霉毒素含量呈负相关，最终通过与标准曲线比较确定样本中的赭曲霉毒素残留量。

### 2. 技术指标

21. 灵敏度：1ppb (ng/ml)

22. 反应模式：37℃，30min～30min～15min

23. 检测下限：谷物……5ppb；饲料……10ppb

24. 交叉反应率：赭曲霉毒素A……100%

25. 样本回收率：谷物及配合饲料……85%±15%

### 3. 试剂盒组成

酶标板……96孔；标准品（黑盖）：各1ml 0ppb、1ppb、3ppb、9ppb、27ppb、81ppb；酶标记物（红盖）……1ml；抗体工作液（蓝盖）……5ml；底物液A（白盖）……6ml；底物液B（黑盖）……6ml；终止液（黄盖）……6ml；20×浓缩洗涤液（白盖）……40ml；说明书……1份；盖板膜……1张；自封袋……1个

### 4. 所需器材和试剂

41. 仪器：酶标仪、打印机、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.001g）

42. 微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl，多道300µl

### 5. 样本前处理

51. 样本处理前须知：实验器具须洁净，使用一次性吸头以防污染干扰实验结果。

52. 配液：配液1：70%甲醇V甲醇:V水=7:3；配液2：1M碳酸氢钠溶液；配液3：工作洗涤液20倍稀释。

53. 样本前处理步骤：对于食品类谷物、大豆类等，处理方法为称取4g样品于50ml离心管中，加10ml 70%甲醇，振荡5分钟，离心10分钟；取1ml上清，加入1ml 1M碳酸氢钠，振荡；最终取50µl进行分析。样本稀释倍数：5，检测下限：5ppb。

### 6. 酶联免疫试验步骤

从4℃取出所需试剂，室温平衡30分钟以上。准备微孔板及框架，标记样本与标准品对应孔位，进行加样及洗涤，按步骤加入酶标记物及显色底物，最后用终止液终止反应并测量吸光度（建议双波长450/630nm），确保在终止反应后10分钟内完成测定。

### 7. 结果分析

计算标准液或样本的百分吸光率，绘制标准曲线，求出样本浓度。利用EVO视讯专业分析软件可快速准确处理大量样本数据。

### 8. 注意事项

试剂和样本需在25℃下操作，确保洗板时避免板孔干燥，混合均匀，避免光照影响，可提高实验的重复性。在操作过程中需避免与皮肤接触的腐蚀性液体。

### 9. 贮藏及保存期

试剂盒需储存于2-8℃，避免冷冻，保质期为1年。请根据包装盒上的生产日期进行跟踪。